Evaluación de una prueba de reacción en cadena de la polimerasa múltiplex anidada para la detección de HTLV-1

El Perú es un área endémica al virus linfotrópico T humano tipo 1 (HTLV-1) y para su confirmación diagnóstica se usa pruebas serológicas que pueden dar resultados no concluyentes. Objetivos: evaluar una prueba de PCR múltiplex anidada para diagnosticar el HTLV-1. Métodos: la validación de la PCR se realizó con primers dirigidos a las regiones Pol y LTR del HTLV-1. Se empleó el gen ß-globina como control endógeno interno y el límite de detección se evaluó con células MT2. Los parámetros de precisión diagnóstica se evaluaron frente a 95 muestras sanguíneas de Referencia. Resultados: la prueba evaluada obtuvo un límite de detección de 0,5 ng/µL de ADN sensibilidad diagnóstica=97,1%, especificidad diagnóstica y analítica=100%, vpn=97,2%, vpp, repetibilidad y reproducibilidad=100%; Kappa, Índice Youden=0,97. Conclusiones: la prueba evaluada presenta un alto rendimiento diagnóstico y debido a su bajo costo se recomienda su implementación en el algoritmo del diagnóstico de HTLV-1 en Perú.

Peru is an endemic area for human T-lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) and for its diagnostic confirmation serological tests are used, which can give inconclusive results. Objectives: to evaluate a nested multiplex PCR test to diagnose HTLV-1. Methods: PCR validation was performed with primers targeting the Pol and LTR regions of HTLV-1. The ß-globin gene was used as an internal endogenous control and the detection limit was evaluated with MT2 cells. Diagnostic accuracy parameters were evaluated against 95 Reference blood samples. Results: the evaluated test obtained a detection limit of 0.5 ng/µL of DNA; diagnostic sensitivity=97.1%, diagnostic and analytical specificity=100%, vpn=97.2%, vpp, repeatability and reproducibility=100%; Kappa, Youden Index=0.97. Conclusions: the evaluated test has a high diagnostic performance and due to its low cost, its implementation in the HTLV-1 diagnosis algorithm in Peru is recommended.

Estandarización y validación de un western blot para el diagnóstico del virus de inmunodeficiencia humana / Standardization and validation of a western blot for the diagnosis of human immunodeficiency virus

Ojetivos: Estandarizar y validar una prueba de western blot para el diagnóstico del virus de inmunodeficiencia humana. Métodos: Se realizó un estudio observacional prospectivo durante el 2017 y 2018. Se estandarizó la prueba de western blot, usando la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS PAGE), siendo las tiras blot de nitrocelulosa preparadas con una concentración óptima de antígeno de VIH-1 de 2,71 µg/mm. Se validó el western blot en laboratorio, frente a 400 muestras referentes (300 sueros y 100 plasmas): 200 positivas y 200 negativas a anticuerpos contra VIH-1, siendo la prueba de referencia el Inmunoblot de la marca Fujirebio. Se estimaron los parámetros de rendimiento diagnóstico usando el programa Epidat v3.1 y Excel. Resultados: Se logró identificar ocho bandas importantes del antígeno de VIH-1: p17, p24, p31, p39, gp41, p55, p66 y gp120. De ellas, las que se tomaron como bandas diagnósticas específicas según el Consorcio de normalización de serología para los retrovirus, fueron: p24, p31, gp41 y gp120. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo e índice de validez frente a sueros fueron: 96,7%, 96,0%, 96,0%, 96,6%, 96,3%; y frente a plasmas: 98,0%, 100,0%, 100,0%, 98,0%, 99,0% respectivamente. No se encontraron falsos positivos y negativos, pero si algunos indeterminados. Conclusión: El desarrollo de esta prueba western blot con tecnología propia, presentó similar rendimiento diagnóstico a la prueba de referencia, sin mostrar reacciones cruzadas; siendo útil para la confirmación del VIH.

Objectives: To standardize and validate a western blot test for the diagnosis of human immunodeficiency virus. Methods: A prospective observational study was carried out during 2017 and 2018. The western blot test was standardized, using the polyacrylamide gel electrophoresis technique with sodium dodecyl sulfate (SDS PAGE), being the nitrocellulose blot strips prepared with an Optimal HIV-1 antigen concentration of 2.71 µg / mm. The western blot was validated in the laboratory against 400 reference samples (300 sera and 100 plasmas): 200 positive and 200 negatives for antibodies against HIV-1, being the reference test the Immunoblot of the Fujirebio brand. Diagnostic performance parameters were estimated using Epidat v3.1 and Excel. Results: Eight important bands of the HIV-1 antigen were identified: p17, p24, p31, p39, gp41, p55, p66, and gp120. According to the Consortium for the normalization of serology for retroviruse, those that were taken as specific diagnostic bands were: p24, p31, gp41, and gp120. The sensitivity, specificity, positive and negative predictive value and validity index against sera were: 96.7%, 96.0%, 96.0%, 96.6%, 96.3%; and against plasmas: 98.0%, 100.0%, 100.0%, 98.0%, 99.0% respectively. No false positives and negatives were found, but some were undetermined. Conclusions: The development of this western blot test with proprietary technology presented similar diagnostic performance to the reference test, without showing cross-reactions, being useful for confirming HIV.

Análisis citogenético en linfocitos de trabajadores expuestos a radiación ionizante en una unidad de cardiología intervencional de Chile: estudio piloto y revisión de la literatura / Citogenetic effects upon lymphocyes in subjects exposed to ionizing radiadion in an interventional laboratory cardiology: pilot study and literature review

ANTECEDENTES: Un número creciente de artículos está llamando la atención en forma consistente sobre la eventual asociación que existe entre los denominados trabajadores ocupacionalmente expuestos a bajos niveles de radiación ionizante (POEs) y una mayor frecuencia de aberraciones cromosómicas, a nivel Sudamericano estos estudios son escasos. OBJETIVO: Evaluar la frecuencia de aberraciones cromosómicas en linfocitos de sangre periférica de POEs de un hospital y de sujetos sanos. Adicionalmente, se realizó una revisión exhaustiva de los artículos que a la fecha abordaron este tema. MATERIAL Y MÉTODO: Se condujo un análisis citogenético destinado a cuantificar las aberraciones cromosómicas en sangre periférica de linfocitos de 6 POEs de la unidad de Cardiología Intervencional y, como controles, 6 muestras de sujetos de la población general fueron analizadas. RESULTADOS: Se observó un importante contraste en el número de aberraciones cromosómicas presentadas en los POEs versus la población general no expuesta a radiaciones ionizantes, siendo esta de una relación de 6:1, respectivamente. CONCLUSIÓN: Los resultados preliminares indican una mayor frecuencia de aberraciones cromosómicas en los POEs versus la población general, sin embargo, se deberá esperar los resultados de la segunda fase de investigación, donde al ampliar la muestra en análisis se podrán obtener conclusiones estadísticamente significativas.

BACKGROUND: There is growing evidence of an increased number of chromosomes aberrations in subjects exposed to low levels of ionizing radiation (POEs). There are few studies on this subject in Latin America AIM: To evaluate the frequency of chromosome aberrations in lymphocytes obtained from peripheral blood in subjects working in laboratories where low levels of ionizing radiation are present and to compare these findings to those of unexposed subjects. METHODS: A cytogenic analysis to quantify chromosome aberrations was performed in 6 POs subjects from a cardiology invasive laboratory and 6 controls from a general unexposed population. RESULTS: Compared to controls, an approximately 6-fold increase in the number of chromosome aberrations was observed.in subjects exposed to ionizing radiation CONCLUSION: These preliminary results indicate that there is an increased number of chromosome aberrations in subjects exposed to low levels of ionizing radiation, as occurs in people working in a cardiology interventional laboratory. Studies in large numbers of subjects and preferably followed prospectively are needed to evaluate more precisely this effect.